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臨床基因擴增實(shí)驗室案例

作者:admin 出處:科瓦特發(fā)表時(shí)間:2016-08-29 13:30:00
 

項目客戶(hù):山東大學(xué)附屬生殖醫院
項目名稱(chēng):臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室,分子遺傳室
項目面積:17460平方米
項目地點(diǎn):山東濟南
建設單位:中山市科瓦特實(shí)驗室
項目?jì)热?/strong>:
實(shí)驗室裝修工程
實(shí)驗室空調與潔凈工程
實(shí)驗室通風(fēng)工程
實(shí)驗室供氣系統
實(shí)驗室純水系統
實(shí)驗室環(huán)保系統

以下為科瓦特實(shí)驗室驗收后部分案例現場(chǎng)展示

臨床基本擴增實(shí)驗室
             實(shí)驗室消毒區與傳遞區
基本實(shí)驗室
實(shí)驗室裝修細節圖:
擴增實(shí)驗室緩沖區PCR實(shí)驗室
           實(shí)驗室走廊                                                      主實(shí)驗室
實(shí)驗室空調與照明PCR實(shí)驗室準備區
         實(shí)驗室通風(fēng)過(guò)濾與照明                                       PCR實(shí)驗室準備區
分子遺傳室實(shí)驗室遺傳基因研究區
           分子遺傳室                                                   遺傳基因研究區
PCR樣本分析區PCR清洗區
                PCR標本制備區                                       PCR清洗區
 1 概述 
臨床基因擴增實(shí)驗又稱(chēng)PCR實(shí)驗,這種實(shí)驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實(shí)驗室和非常規范的操作
為前提。近年來(lái)對臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室的建設越來(lái)越得到重視,因為它對檢測結果的可靠性、準確性
和安全性起到至關(guān)重要的作用。本文主要從臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室的平面布局,空調通風(fēng)系統設計、氣
流控制和污染的防制幾個(gè)方面對 
實(shí)驗室設計中的主要特點(diǎn)進(jìn)行了闡述。臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室設計的核
心問(wèn)題是如何避免污染。因此,實(shí)驗室的平面布局、空調通風(fēng)系統設計、氣流控制等都是圍繞這個(gè)核心問(wèn)
題進(jìn)行的。下面就對這幾個(gè)方面分別進(jìn)說(shuō)明。 

 
2 PCR實(shí)驗室平面布局 
臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室原則上分為四個(gè)單獨的工作區域:試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混
合物配制
和擴增區、擴增產(chǎn)物分析區。為避免交叉污染,進(jìn)入各個(gè)工作區域必須嚴格遵循單一方向進(jìn)行,
即只能從試劑貯存
和準備區→標本制備區→擴增反應混合物配制和擴增區→擴增產(chǎn)物分析區。 各實(shí)驗區之
間的試劑及樣品傳遞應通過(guò)傳遞窗進(jìn)行。 

PCR實(shí)驗室平面布局圖
                               PCR實(shí)驗室平面布置示意圖如圖1所示。 
     
3 實(shí)驗室空調通風(fēng)系統設計及壓力控制 
PCR實(shí)驗室并沒(méi)有嚴格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣
流組織形式。
同時(shí),要嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗區的壓力要求。 
 
3.1 試劑貯存和準備區 
該實(shí)驗區主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材
料應直接運
送至該區,不得經(jīng)過(guò)其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試
劑。 
對與氣流壓力的控制,本區并沒(méi)有嚴格的要求。 
 
3.2 標本制備區 
該區域主要進(jìn)行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA
時(shí)cDNA的合成。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進(jìn)入本區的氣溶膠污
染。另外,由于在加樣操作中可能會(huì )
發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區內不必要的走動(dòng)。 
 
3.3 擴增反應混合物配制和擴增區 
該區域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來(lái)自樣本制備區)的
加入和主反應混合
液(來(lái)自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進(jìn)行。在巢式PCR測定中,
通常在 輪擴增后必須打開(kāi)反應
管,因此巢式擴增有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區內進(jìn)行。 
本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,
應盡量減少在本區
內的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應在超凈臺內進(jìn)行。 
 
3.4 擴增產(chǎn)物分析區 
該區域主要進(jìn)行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測,此區域可不設。 
本區是最主要的擴增產(chǎn)物污染來(lái)源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴
增產(chǎn)物從本區擴散
至其它區域。 
 
4 污染的預防與控制 
PCR實(shí)驗室設計的核心問(wèn)題是如何避免污染。在實(shí)際工作中,常見(jiàn)的有以下幾種污染類(lèi)型:擴增產(chǎn)物的污
染;天然基因組DNA
的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染,實(shí)驗就必須停止,直到
找到污染源為止,而且實(shí)驗結果必須作廢,
需重新進(jìn)行實(shí)驗。所以發(fā)生污染后再?lài)@實(shí)驗室來(lái)尋找污染源
不但耗時(shí)而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應是
預防,而不是排除。 
 
4.1 工作區域的嚴格劃分 
(1)各個(gè)實(shí)驗區域設置合理; 
(2)各個(gè)實(shí)驗區域要有明顯的標記(如醒目的門(mén)牌或不同的地面顏色等),以避免各個(gè)不同實(shí)驗區域設
備物品、試劑等發(fā)生
混淆。 
 
4.2 合理的系統設置 
(1)合理的空調通風(fēng)系統設置,盡量采用全送全排的空調系統; 
(2)嚴格的氣流壓力控制,保證不同的實(shí)驗區內不同的壓力要求。
 
4.3 規范的操作 
(1)臨床基因擴增檢驗實(shí)驗室的技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓,經(jīng)培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗
的工作; 
(2)在實(shí)驗操作過(guò)程中,操作者必須戴手套,并經(jīng)常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效
地防止污染的措施; 
(3)清潔工作及時(shí)、正確。實(shí)驗工作結束后,必須立即對本區進(jìn)行清潔。除常規的消毒液體對表面進(jìn)行
擦拭消毒或紫外線(xiàn)燈的照射消毒外,對一些實(shí)驗設備還應進(jìn)行高壓消毒處理。 
 
4.4 嚴格的管理 
(1)嚴格控制進(jìn)出實(shí)驗室的人員。與實(shí)驗無(wú)關(guān)的人員不得隨意進(jìn)出實(shí)驗室,有條件的情況下要設置獨立
的通道和進(jìn)出整個(gè)實(shí)驗區
的門(mén); 
(2)在各個(gè)實(shí)驗區域使用帶有明顯區別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開(kāi)時(shí)不得將本區的
工作服帶至其它區域; 
(3)盡量減少在實(shí)驗區內不必要的走動(dòng)以減少交叉污染的可能性。 
(4)擴增產(chǎn)物分析區是最主要的擴增產(chǎn)物污染來(lái)源,廢液不能在實(shí)驗室中傾倒,必須經(jīng)消毒液浸泡消毒
后在遠離實(shí)驗室的地方棄
掉,用過(guò)的吸頭等一次性材料也應經(jīng)消毒液浸泡消毒后統一處理,如焚燒等; 
(5)擴增產(chǎn)物分析區可能會(huì )用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),應特別注意實(shí)驗人員的安全防護。 
 
4.5 完備的實(shí)驗室配套設施 
完備的實(shí)驗室配套設施是保證實(shí)驗工作的必要條件,應根據各個(gè)實(shí)驗室實(shí)驗內容的不同配備相應的設備
和儀器,如超凈工作臺、
離心機、加樣器等。

更多實(shí)驗室整體規劃設計方案與案例請聯(lián)系科瓦特實(shí)驗室。0760-23626816.
QQ: 1695536823
免費設計方案與報價(jià):180-2201-9058 陳工
技術(shù)咨詢(xún):133-1828-1228 周先生

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